是否存在我需要遵守的任何基因序列限制/设计指南?

重复结构和极端 GC 含量是合成问题的主要驱动力。下列规则可引导您进行设计。但是,请注意,您可以通过限制重复序列和均衡 GC 含量来提高成功的概率。

例如,如果您有一个总 GC 含量为 66% 的基因,您必须把它降低到至少 65% 时才能合成它,但如果进一步将其降低到 60% 及以下,这个基因就更有可能合成成功。这同样有利于消除重复序列、减少均聚物拉伸以及消除 GC 窗口中的极端基因突变。您越能避免或减少基因中存在这种结构,就越有可能成功合成基因。

规则

  • 避免重复序列 ≥ 20 bp 或 Tm ≥ 60 C 的情况,且整体 GC 含量必须保持在 25% 到 65% 之间
  • 避免基因内部 GC 含量差异过大(即最高和最低 50 bp 延伸片段之间的 GC 含量差异应不大于 52%)
  • 最小化均聚物,最小化分散在整个序列中的小重复序列的数量/长度
  • 对于 HIS 标签,需将 CAC 和 CAT 密码子结合使用,即 CACCAT

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