Twist 新一代测序 (NGS) 甲基化检测系统

Twist Bioscience 与 New England Biolabs (NEB) 合作，提供新的甲基化测序工作流，可提高文库质量，避免在文库制备过程中使用重亚硫酸盐导致的 DNA 损伤。
 
该工作流包括未甲基化胞嘧啶的酶转化（见图），以确定甲基胞嘧啶 (5mC) 和羟甲基胞嘧啶 (5hmC) 的位点。
 
酶转化产生更完整的文库，具有更好的表达，并最终实现更敏感的甲基化检测。文库制备系统适用于使用 Twist 甲基化组合进行全基因组测序和下游富集。

EM 测序转化包括一系列酶促步骤，将未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶。最终结果与常规亚硫酸氢盐转化相同，从而使 EM 测序与使用 Bismark 和 bwa-meth 的现有分析流程兼容。

Twist 快速杂交和洗脱试剂盒提供更优的性能和更佳的灵活性。可对试剂和步骤进行优化，以调整下游测序指标，并缩短实际操作时间和减少移液器的使用。

Twist 自定义甲基化探针组采用高度复杂的算法设计，对不同大小的靶向区域有着卓越的捕获效率。这些组分共同确保了对定制化靶向区域的最佳杂交捕获。

在靶向甲基化测序工作流中经常发生脱靶捕获，因为在文库制备期间，转化过程降低了样本的复杂度。

为了最大限度地捕获转化后样本，Twist 新一代测序 (NGS) 甲基化检测系统采用专为甲基化检测设计的专有阻断剂。这种试剂称为甲基化促进剂，可减少多达一半的脱靶捕获。
 

甲基化水平在整个人类基因组中差异很大，因此可使用不同甲基化水平区域 (DMR) 来识别特定癌症。

为了测试甲基化水平对 Twist 新一代测序 (NGS) 甲基化检测系统性能的影响，通过以限定比率结合低甲基化和高甲基化基因组 DNA，生成不同甲基化水平（0–100% 甲基化）的文库。该分析显示甲基化水平对最终测序指标的影响极小。

Twist 新一代测序 (NGS) 甲基化检测系统还能以高灵敏度捕获低甲基化和高甲基化区域。