Was sind die Sequenzakzeptanzkriterien für Express-Gene?

Alle klonalen Gensequenzen zwischen 300 bp und 5000 bp, die von unserem Screener als „Standard“-Komplexität bewertet werden, sind für den Express-Service berechtigt.

Unser Scoring-System verwendet ein maschinelles Lernmodell, das mehrere Sequenzparameter analysiert und kombiniert (z. B. Gesamt-GC-Prozent, maximale Homopolymerlänge, maximale Wiederholungslänge, Sequenzlänge, Wiederholungsdichte usw.). Dieses Modell wurde mithilfe unserer historischen Herstellungsdaten trainiert und liefert eine genauere Abschätzung des Produktionserfolgs von Genen und Antikörperprodukten.

Komplexitätsprobleme werden hauptsächlich durch sich wiederholende Strukturen und extremen GC-Gehalt verursacht. Richtlinien für das Sequenzdesign sind online und unten verfügbar:

  • Vermeiden Sie Repeats von ≥ 20 bp oder Tm ≥ 60 °C 
  • Der globale GC-Gehalt muss zwischen 25 % und 65 % liegen
  • Vermeiden Sie extreme Unterschiede im GC-Gehalt innerhalb eines Gens (d. h. der Unterschied zwischen der 50-bp-Region mit dem höchsten GC-Gehalt und der Region mit dem niedrigsten GC-Gehalt darf nicht größer als 52 % sein).
  • Minimieren Sie Homopolymere
  • Minimieren Sie die Anzahl/Länge der kleinen Repeats, die über die Sequenz verteilt sind
  • Verwenden Sie für HIS-Tags eine Kombination von CAC- und CAT-Codons, d. h. CACCAT

Die Wahrscheinlichkeit der Sequenzakzeptanz verbessert sich durch die Begrenzung von Repeats und die Reduzierung des GC-Gehalts. Zum Beispiel: Ein Gen kann mit einem Gesamt-GC-Gehalt von 66 % als „Nicht akzeptiert“ bewertet werden, bei einer Reduzierung auf 65 % oder weniger kann es jedoch als „komplexe“ Sequenz akzeptiert werden. Eine weitere Senkung des GC-Gehalts auf etwa 60 % oder weniger kann die Komplexitätsbewertung auf „Standard“ verbessern. Zu diesem Zeitpunkt wäre die Sequenz für den Express-Service geeignet. Gleiches gilt für das Eliminieren von Wiederholungen, das Reduzieren von Homopolymerregionen und das Ausgleichen extremer Variationen in GC-Fenstern. Je mehr solche Strukturen in einem Gen vermieden oder reduziert werden können, desto wahrscheinlicher ist es, dass es sich für den Express-Service qualifiziert.

Weitere Informationen zu unserem Bewertungsalgorithmus und Sequenzdesign finden Sie in unseren FAQs.

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