如果我使用限制性酶进行克隆,该如何设计插入位点?

我们使用专有的基于同源性的克隆方法来组装我们的克隆基因,因此限制位点对克隆并不重要,您在设计插入片段时也不需要考虑 Twist 的克隆设计。但如果您的插入位点位于两个限制性位点之间,请将这些位点作为载体骨架的一部分,以确保框架具备位点特性。

有两种使用限制性内切酶克隆的选择。

选择 1 - 在插入片段上加入限制性位点

包括插入序列两端的整个限制性内切酶位点。限制性内切酶位点将是计算机中插入片段的一部分。

https://lh4.googleusercontent.com/txAUfecGO5MqdYV4VC7uHXd2dVg7O6XOJAT9xKzCzwS4xLCnoswYGjFcx5TBoSoxFVjTwZuXJbvaYachT0e8yLBCad0yp50TlSiUdZ5eZ_gZDCGv7NtR8r_DDnNWk0mlxERPJN-X

 

                       

当订购基因时,您必须在插入片段上加入限制性内切酶位点。在定制载体存储方案中,如果您在订单中排除了基因上的限制性内切酶位点,那么您的最终产品中将完全没有限制性内切酶位点。

 

选择 2 - 在载体上加入限制性位点

请勿在插入序列中包含限制性内切酶位点。在定制载体存储表的“载体 + 插入”框中加入每个完整的限制性内切酶位点。限制性内切酶位点将是计算机中载体的一部分。

 

https://lh4.googleusercontent.com/F9pj9Ttle_JYZ_kePkVmTe3zw22acXAXGuDIGCPDy8YO-PPlD7qcyKavjEyDb5yqv-Y-xzNDCfjWd7D3VRtBXGbBz2KZNlTBilcwB9L7OeiVs5mAfISP2qDsiQZz0P84XD9Q84-v

当订购基因时,请勿在插入片段上加入限制性内切酶位点。在定制载体存储方案中,如果您在订单中添加了基因上的限制性内切酶位点,那么您的最终产品中将重复出现限制性内切酶位点。

 

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